「消毒生产企业现场审核」现场消毒评价方法解读

【现场消毒评价方法】编制意义

      目前，【传染病防控】形势依然严峻，一些被认为早已得到有效控制的传染病如结核病、霍乱、麻疹等有卷土重来、死灰复燃的态势；新发传染病如高致病性禽流感、H7N9、埃博拉出血热、中东呼吸综合症等不断出现；生物恐怖导致的高致病性微生物也时刻威胁着人类的健康。经济全球化带来疫情全球化，使传染病流行速度增快、范围扩大、危害增强。多重耐药菌问题已给临床抗感染治疗带来了严重的挑战，已成为重大公共卫生问题。上述面临的形势，均预示着未来传染（感染）性疾病防控任重道远。 

    【现场消毒】是切断病原微生物传播的重要途径，是控制传染病流行的重要措施之一。在实际工作中，一方面，消毒不到位或过度消毒现象时有发生；另一方面，现有消毒产品大多在实验室环境中按照产品申报标准评价，许多数据都是基于试验指示物而非疫源地病原微生物，现场消毒时已知实验室结果只能起提示作用；杀菌性能又受到时间、温湿度、浓度、pH等因素的影响，而现场环境具有多样性，利用这些产品进行现场消毒后是否能达到安全水平无法得出准确结论。及时开展现场消毒评价，确保消毒达到合理水平，是彻底消除病原微生物，降低传染病发病率的关键。目前，我国涉及消毒评价方法零星分布于不同的标准与规范中，没有全面系统的制定现场消毒效果评价方法，特别是重大传染病疫源地、突发公共卫生事件和重大活动卫生保障的消毒消毒评价方法不明确，且以往标准在实施过程中存在一些问题。随着当前传染病防控形势日益严峻及我国卫生消毒管理规范化发展，建立健全统一、完善、可操作性强的现场消毒评价方法已成为传染病防控的必然要求。

【现场消毒评价方法】编制背景

      《消毒技术规范》是我国现行消毒专业最全面和权威的参考资料，是多年来国内消毒专家的知识精华。1988年卫生部制订发布第一版《消毒技术规范》，并于1991年、1999年、2002年进行三次修订。这些版本均规定了疫源地消毒评价方法及标准。同时，自1995年以来，GB15981《消毒与灭菌效果评价方法与标准》、GB15982《医院消毒卫生标准》、GB19193《疫源地消毒总则》等相继颁布，分别规定了【紫外线消毒】表面、医院及【疫源地消毒】标准及评价方法。近年来又相继修订了医院、【疫源地消毒效果评价标准和方法】，发布了地震灾区预防性消毒效果评价标准和方法。这些规范标准实施以来，在传染病防控和医院感染控制，促进我国消毒事业发展等工作中发挥了重要作用，但在实施过程中，也发现了一些问题，如缺少突发急性传染病疫源地消毒效果评价方法、高致病性病原微生物引起的疫源地消毒效果评价方法、指示微生物选择及评价上操作性不强等。为适应新形势的需要，使其更具操作性，本标准在《消毒技术规范》（2002版）、GB19193《疫源地消毒总则》等规范标准的基础上，对传染病疫源地、突发公共卫生事件和重大活动卫生保障的环境和物品的消毒效果评价方法进行修改和完善。

【现场消毒评价方法】修订依据

本标准为首次制定，是方法类标准，主要参照《消毒技术规范》（2002版）中【疫源地消毒效果微生物学评价】及GB19193《疫源地消毒总则》中消毒效果评价等内容；并根据应用实际，针对传染病疫源地、突发【公共卫生】事件和【重大活动卫生】保障的【环境和物品消毒效果评价】的基本原则、现场消毒评价方法等提出了明确的要求。在制定过程中，严格按照《标准化工作指导第1部分：标准的结构和编写》（GB/T1.1-2009）要求编写，并遵循适应性、可操作性、普遍适用性及易于推广的原则，以保护人群健康为基础。

（一）术语和定义

     本标准涉及了“目标微生物”、“指示微生物”、“现场消毒”3个术语。在以往的文献和标准中尚未有3个术语定义。“目标微生物”主要包括2个方面，一方面指在传染病发生或流行消毒时必须要杀灭的病原微生物，如引起麻疹时的麻疹病毒、引起霍乱的霍乱弧菌等；另一方面指预防性消毒时某特定消毒对象的代表微生物，如对集中空调消毒效果评价时检测的β-溶血性链球菌，对水消毒效果评价时检测大肠杆菌等。“指示微生物”是指供消毒效果评价时使用的人工污染的微生物，此类微生物具有确定的抗力并能代表某类微生物，如进行消毒产品检验时所用的大肠杆菌8099、金黄色葡萄球菌ATCC6538、枯草杆菌黑色变种芽胞ATCC9372等。“现场消毒”在本标准中主要特指发生传染病流行、突发公共卫生事件或重大活动卫生保障时对现场环境和物品进行的消毒，特指传染病疫源地、突发公共卫生事件或重大活动卫生保障的现场。

（二）【现场消毒】评价原则

     1.基本原则。本部分内容主要参考GB19193《疫源地消毒总则》附录中C1“疫源地消毒效果评价的总体要求”。与其相比，提出了进行现场消毒效果评价前，应先进行消毒过程评价。现场消毒效果评价方法主要包括现场评价方法和现场模拟评价方法，现场评价方法以检测消毒对象上自然菌或目标微生物是否存在或存在数量作为判定依据，主要用于重大活动卫生保障和目标微生物明确的传染病疫源地、突发公共卫生事件消毒效果评价，包括对其物体表面、空气及生活饮用水等消毒对象中自然菌的消毒效果以及传染病疫源地、突发公共卫生事件中目标微生物的消毒效果。现场模拟评价方法是以检测指示微生物是否存在或存在的数量作为判定依据，主要用于对目标微生物无法检测、不明原因的传染病疫源地及突发公共卫生事件、风险等级较高的污染如炭疽、SARS进行的消毒效果评价。所有的评价指标均应按照文中所述杀灭对数值≥1.00或≥3.00或杀灭率≥90%外，传染病疫源地、突发公共卫生事件还不得检出目标微生物，此外还应符合特定场所相应标准规范，如针对公共场所的消毒效果评价，除符合本文中规定的杀灭对数值或杀灭率外，还应符合公共场所相应的标准规范。

     2.指示微生物选择。明确提出了现场模拟消毒效果评价，应根据病原微生物对消毒因子的敏感性选择相应的指示微生物。为使评价方法更贴近实际，与GB19193《疫源地消毒总则》相比，本标准中指示微生物选择不再按照15981执行，而是综合国内外标准规范及文献综述，选择大肠杆菌（Escherichia coli）8099、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）ATCC6538作为亲脂病毒、细菌繁殖体的指示微生物，选择白色念珠菌（Candida albicans）ATCC10231作为致病性真菌指示微生物，选择龟分枝杆菌脓肿亚种（Mycobacterium chelonae subsp. Abscessus）ATCC 93326作为亲水病毒、人结核分枝杆菌指示微生物，选择枯草杆菌黑色变种芽孢（Bacillus subtilis var.niger）ATCC9372作为细菌芽孢指示微生物。明确提出现场模拟评价方法已选择抗力强的指示微生物进行评价时可以不再选择抗力弱的指示微生物，如已知病原微生物的抗力低于细菌芽孢，但其对社会、人类造成的危害特别重大，传染性特别强，如SARS、埃博拉出血热等烈性急性传染病时，为确保杀灭疫区所有病原微生物，可以选择选择抗力最强的枯草杆菌黑色变种芽孢ATCC9372作为指示微生物以确保消毒效果，不再选择其他抗力弱如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、龟分枝杆菌脓肿亚种等进行评价。

     选择以上微生物作为现场消毒效果评价指示微生物主要依据有以下几个方面：一是GB15981《消毒与灭菌效果的评价方法与标准》涉及到了压力蒸汽灭菌、紫外线表面及液体消毒剂等3个部分的评价指示微生物，如何选择合理的现场消毒效果评价指示微生物操作性不强；二是现行GB15981为1995年实施，随着20多年消毒技术的发展，已不能适应目前工作的需要。三是一般认为，微生物对消毒因子的敏感性从高到低的依次为亲脂病毒、细菌繁殖体、真菌、亲水病毒、分枝杆菌、细菌芽孢、朊毒。因此，根据其敏感性及《消毒技术规范》（2002年版）消毒产品微生物杀灭试验涉及微生物的特性确定合适的指示微生物。因消毒试验中涉及的病毒类指示微如脊髓灰质炎病毒-Ⅰ型疫苗株（Poliovirus-Ⅰ）、艾滋病病毒等因其在自然菌的存活率及危害性等特性不适宜用于现场消毒效果评价，因此针对病毒类传染病疫情评价用指示微生物选择其对消毒因子的敏感性高一级别的微生物对应的指示微生物替代。四是美国AOAC、欧洲等消毒产品评价杀芽孢试验中，均规定使用以枯草杆菌芽孢（B.subtilis）为主作为指示微生物，我国《消毒技术规范》（2002年版）也将以枯草杆菌黑色变种芽孢（Bacillus subtilis var.niger）ATCC9372作为细菌芽孢的代表。

（三）现场消毒效果评价方法

     本标准规定了现场评价和现场模拟评价的基本方法，是本标准的主要内容之一。

     1.现场评价方法。规定了物体表面、空气、生活饮用水、污水、污泥以及排泄物、呕吐物采样及检测方法，主要依据《消毒技术规范》（2002年版）4.7疫源地消毒效果的微生物学评价部分及有关的标准规范。有以下几点需要特别说明：一是物体表面采样布点要以桌面、地面、墙面、床头柜、便器等为重点采样对象，在消毒因子难以达到的地方如抽屉、地毯、墙角等要增加采样点。针对每类采样对象采集样本不应少于2个，采样总数不少于30个。消毒前、后采样点应成对设置，不得在同一区内进行。对于不规则物体或小型物体表面（如儿童、玩具、门把手、热水瓶把等）可按实际面积采样，结果计算以CFU/cm2或CFU/件表示。二是基于现场操作方便考虑，空气采样采用平板沉降法而非空气采样器法，此外明确规定了消毒后所用的普通营养琼脂平板中应加入相应的中和剂，以防止消毒因子的持续作用。

     2.现场模拟评价方法。本标准明确现场消毒效果评价采用对指示微生物检测的现场模拟评价方法，并根据病原微生物对消毒因子的敏感性选择相应的指示微生物。所用的指示微生物的菌悬液依据《消毒技术规范》（2002年版）有关内容进行制备。其方法的选择及相关要求基于以下几个方面的考虑：

     （1）基于目前消毒试验技术及有关文献资料，现场消毒后对于空气消毒效果评价，以物体表面模拟现场，即载体的消毒效果来替代，便于实际操作。

     （2）现场模拟评价方法规定了两种染菌方法，即染菌法或载体法，可根据现场情况选择。需要特别注意的是从生物安全的角度，对于死亡率较高的烈性传染病宜选择载体法，采样时不宜将平皿带出消毒现场，可用无菌镊子将载体直接取出移入试管中进行计数存活菌数，以防止平皿被现场污染。

     （3）按照重点区域布点原则布点。规定根据现场情况，选择桌面、地面、墙壁及墙角、书橱、床底、屋顶、抽屉等消毒因子难以到达的地方布点，每类采样对象采集样本不少于2个，总布点数量不少于30个。此布点要求兼顾局部与整体。